外周血PSA、PSA mRNA聯合檢測在前列腺癌診斷中的臨床應用

    時間:2024-08-11 16:49:21 藥學畢業論文 我要投稿
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    外周血PSA、PSA mRNA聯合檢測在前列腺癌診斷中的臨床應用

    作者:辛華 馬雷 高英英 郭宇航 孫玉鴻 江清林 劉國輝
    【摘要】 目的 探討利用外周血PSA、PSA mRNA聯合檢測診斷前列腺癌(PCa)的臨床應用及意義。方法 運用酶聯免疫分析和巢式RT?PCR檢測22例PCa、10例良性前列腺增生(BPH)患者,5例健康男性和5例健康女性外周血中PSA、PSA mRNA的情況。結果 PCa患者血清PSA的水平與臨床分期、Gleason評分有關(P<0?05),而與年齡無關(P>0?05);外周血PSA、PSA mRNA與臨床分期、內分泌治療有關(P<0?05),而與年齡、Gleason評分無關(P<0?05);22例PCa標本中PSA mRNA陽性表達15例,陽性率68%,10例BPH和10例陰性對照標本無表達。結論 利用外周血PSA、PSA mRNA聯合檢測是一種早期發現PCa微轉移,判斷其臨床變化過程、分期、預計復發和評價療效的方法。
    【關鍵詞】 前列腺特異抗原;前列腺癌;前列腺增生;逆轉錄聚合酶鏈式反應
      臨床上大約有50%的前列腺癌(PCa)病人在確診時就已經發生了轉移,病變已屬晚期,預后不良〔1~3〕。國外報道血清游離PSA與外周血PSA mRNA聯合檢測PCa在鑒別良、惡疾病上有一定優越性〔4,5〕。國內這方面報道較少。應用RT?PCR技術檢測外周血中存在的少量癌細胞,可以發現微轉移,對腫瘤的復發、轉移、預后及臨床治療具有指導意義〔6,7〕。本研究采用酶聯免疫技術和巢式RT?PCR技術聯合檢測外周血PSA和PSA mRNA,以提高PCa微轉移的診斷效率、監測復發、預測腫瘤分期及預后。
      1 材料與方法
      1?1 病例資料
      PCa組:選擇2005~2006年佳木斯大學附屬第一醫院、佳木斯市中心醫院門診和住院病人。22例均為初診PCa患者,均經前列腺穿刺病理診斷,年齡64~82歲,平均72歲。22例PCa患者中有15例接受了內分泌治療,7例未接受。BPH組:10例均為行前列腺經尿道電切術后病理證實患者,年齡34~81歲,平均65歲。陰性對照組:5例男性健康志愿者(檢測前1個月限制性生活)和5例女性健康志愿者,血液學指標均正常,年齡25~45歲,平均38歲。
      1?2 儀器及材料

      Ficoll淋巴細胞分離液購自中國醫學科學院天津血液病研究所,總RNA提取RNAiso試劑盒、兩步法RT?PCR試劑盒購自大連生物工程有限公司,引物由上海生物工程服務技術有限公司合成,PSA定量試劑盒購自美國博檢生物試劑有限公司。Biometra Tg PCR 儀:華粵企業集團有限公司;DU800核酸蛋白分析儀:Beckman公司;免疫分析儀器:DNM9602G型酶標分析儀(北京普朗儀器公司)。
      1?3 引物序列

      PCR引物:(1)外引物:PSA?494:5’?TACCCACTGCATCAGGAACA?3’;PSA?960:5’?CCTTGAAGCACACCATTACA?3’。(2)內引物:PSA?559:5’?ACACAGGCCAGGTATTTCAG?3’;PSA?894:5’?GTCCAGCGTCCAGCACACAG?3’。β?actin 上游:5’?CGGGAAATCGTGCGTGACAT?3’;下游:5’?GAACTTTGGGGGATGCTCGC?3’。擴增目的片段長度為712 bp。
      1?4 血清的提取

      抽取空腹靜脈血(各項檢查前)5 ml,立即2 000 r/min離心10 min,分離血清置-20℃保存,1 w內完成實驗。
      1?5 外周血單個核細胞的提取
      抽取5 ml靜脈血(各項檢查前)肝素抗凝,用Ficoll淋巴細胞分離液分離白細胞置-80℃冰箱保存,提取過程按其說明書操作。
      1?6 總RNA的抽提及質量鑒定
      用Trizal試劑提取總RNA,提取過程按其說明書操作。提取產物用1?2%甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA質量。紫外分光光度計下測OD260、OD280,測定RNA純度和濃度。取OD260/OD280值在1?8~2?0范圍內的標本進行逆轉錄。所有實驗中的塑料制品及實驗用具均經0?1轕C水處理后高壓滅菌。
      1?7 RT?PCR
      取1 μg總RNA進行逆轉錄反應;取逆轉錄產物2 μl和PSA上下游外、內引物各1 μl,使用20 μl反應體系進行2次PCR(2次PCR反應體系相同),同時擴增PSA、β?actin和陰性對照cDNA(由健康女性外周血白細胞RNA逆轉錄獲得)。具體循環參數為:94℃ 4 min,94℃ 45 s,55℃ 30 s,72℃ 45 s;25個循環之后,72℃延伸10 min。PCR擴增產物經1%瓊脂糖凝膠電泳后用EB染色,經凝膠成像系統拍照。
      1?8 血清PSA的檢測
      PSA定量檢測由專人嚴格按說明書進行操作。
      1?9 統計學處理
      應用SPSS10?0軟件對數據進行處理,采用t檢驗、χ2檢驗。
      2 結果
      2?1 PCa組、BPH組、陰性對照組血清PSA檢測結果 見表1。表1 PCa組、BPH組、陰性對照組血清PSA的檢測結果(略)
      2?2 PCa組血清PSA檢測結果與臨床參數的關系
      見表2。表2 PCa組血清PSA與

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